Prevalence and risk factors of Eimeria spp. natural infection in sheep from northern Paraná, Brazil / Prevalência e fatores de risco da infecção natural por Eimeira spp. em ovinos na região norte do Paraná, Brasil

Abstract The present study aimed to perform an epidemiological and morphological identification of Eimeria infection in sheep in Brazil. Fecal samples from sheep were collected from 20 farms in northern Paraná, Brazil. An epidemiological questionnaire was used to evaluate the risk factors. Fecal samples containing oocysts per gram of feces (OoPG) ≥1000 were subjected to the modified Willis-Mollay method to perform oocyst identification. Sporulated oocysts were observed microscopically for morphological identification. A total of 807 fecal samples were collected. Based on the morphological characteristics of the sporulated oocysts, 10 species of Eimeria were identified, with main species observed: Eimeira ovinoidalis (98.1%), Eimeria crandallis (87.6%), Eimeria parva (79.1%), and Eimeria bakuensis (60.8%). Only 2.6% (7/268) of the sheep were infected with a single species, 4.8% (13/268) contained two different species, and 92.5% (248/268) were infected with three or more species. The analysis of risk factors showed that an intensive rearing, no rotation of pasture, dirt, and slatted floors, and age up to 12 months were associated with infection. This study showed a high prevalence of Eimeria natural infection in sheep from northern Paraná, Brazil. Furthermore, based on the risk factors, good management and hygiene practices must be employed to avoid infection.

Resumo O presente estudo teve como objetivo realizar uma avaliação epidemiológica e morfométrica da infecção por Eimeria em ovinos no Brasil. Amostras fecais de ovinos foram coletadas em 20 fazendas no sul do Brasil. Um questionário epidemiológico foi utilizado para avaliar os fatores de risco. Amostras fecais, contendo oocistos por grama de fezes (OoPG) ≥1000, foram submetidas ao método de Willis-Mollay modificado para realizar a identificação de oocistos. Oocistos esporulados foram observados microscopicamente para identificação morfológica. Foram coletadas 807 amostras fecais. Com base nas características morfológicas e morfométricas dos oocistos esporulados, foram identificadas 10 espécies de Eimeria, com as principais espécies observadas: Eimeria ovinoidalis (98,1%), Eimeria crandallis (87,6%), Eimeria parva (79,1%) e Eimeria bakuensis (60,8%). Apenas 2,6% (7/268) dos ovinos estavam infectados com uma única espécie, 4,8% (13/268) continham duas espécies diferentes e 92,5% (248/268) estavam infectados com três ou mais espécies. A análise dos fatores de risco mostrou que uma criação intensiva, sem rotação de pasto, terra, piso de ripa e idade até 12 meses foram associadas à infecção. Este estudo mostrou uma alta prevalência de infecção natural por Eimeria em ovinos do norte do Paraná, Brasil. Além disso, com base nos fatores de risco, boas práticas de manejo e higiene devem ser empregadas para evitar infecções.

First study of Cryptosporidium spp. occurrence in eared doves (Zenaida auriculata) / Primeiro estudo de ocorrência de Cryptosporidium spp. em pomba-de-bando (Zenaida auriculata)

Abstract Cryptosporidium is a protozoan parasite with a wide range of hosts, including humans. However, only a few Cryptosporidium species have been described in birds (C. meleagridis, C. baileyi, C. galli and C. avium). The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. in feces of eared doves (Zenaida auriculata), followed by molecular characterization of the parasite. A total of 196 animals of both sexes were trap-captured; the animals were culled and the intestinal contents were collected for DNA extraction. After extraction, a nested-PCR (nPCR), which amplifies a fragment of the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp., was performed. The amplicons obtained were purified and sequenced. PCR analysis revealed that 30 animals (15.3%) were positive for Cryptosporidium spp. There was no significant sex-dependent enrichment of Cryptosporidium occurrence (p > 0.05). Only 15 out of the 30 positive samples were successfully sequenced and their species determined, of which, 13 (86.7%) and 2 (13.3%) were C. meleagridis and C. galli, respectively. Herein, we present for the first time a molecular characterization of Cryptosporidium from feces of eared doves (Z. auriculata) and propose that these birds are a potential source of C. meleagridis infection in humans.

Resumo Cryptosporidium é um protozoário com uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os seres humanos. No entanto, poucas espécies têm sido descritas em aves (Cryptosporidium meleagridis, C. baileyi, C. galli e C. avium). O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em fezes de pombas-de-bando (Zenaida auriculata), e realizar a caracterização molecular dos isolados. Um total de 196 animais de ambos os sexos foram capturados, eutanasiados e o conteúdo intestinal recolhido para extração de DNA. Após a extração, realizou-se uma nested-PCR (nPCR), que amplifica um fragmento do gene 18S rRNA do Cryptosporidium spp.. Os fragmentos obtidos foram purificados e encaminhados para sequenciamento. Os resultados da n-PCR revelaram 30 animais (15.3%) positivos para Cryptosporidium spp.. Quanto ao sexo dos animais não foram observadas diferenças estatísticas significativas (p > 0.05). Somente 15 de 30 amostras positivas foram sequenciadas com sucesso e as espécies determinadas, das quais, 13 (86.7%) e 2 (13.3%) foram C. meleagridis e C. galli, respectivamente. Esse é o primeiro estudo com caracterização molecular de Cryptosporidium de fezes de pombas-de-bando (Z. auriculata), e propõe serem esses animais potenciais fonte de infecção de C. meleagridis para humanos.

Cryptosporidium occurrence in ruminants from the North Pioneer mesoregion of Paraná, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em ruminantes da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná, Brasil

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium in cattle and sheep from the North Pioneer mesoregion of the state of Paraná. For this, 317 stool samples were collected from cattle and sheep on 16 properties in six municipalities in the North Pioneer mesoregion of Paraná. For detection of Cryptosporidium species, molecular analysis was performed using nested-PCR techniques targeting the 18S rRNA gene. Of the 37 beef cows and 115 calves analyzed, four (10.8%) and 14 (12.2%), respectively, were positive for Cryptosporidium. Of the 12 cows and 52 calves, one (8.3%) and 14 (26.9%), respectively, were positive for Cryptosporidium; and of the 42 ewes and 59 lambs, six (14.3%) and 12 (20.3%), respectively were positive for Cryptosporidium. Cattle (15.3%) and sheep (17.8%) were both susceptible to infection. All the properties of the municipalities of Assaí, Ibaiti and, Leópolis presented infected animals. The study showed that Cryptosporidium occurs in most municipalities assessed, that dairy calves had a higher risk (Odds Ratio=2,66, p-value=0,018) for infection than beef calves, and that sheep are just as susceptible to infection as are cattle, and that further Cryptosporidium studies are developed.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium em bovinos e ovinos da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná. Para tanto, 317 amostras de fezes destes ruminantes foram colhidas de 16 propriedades de seis municípios do Norte Pioneiro do Paraná. Para detecção de Cryptosporidium spp foi realizada análise molecular pela Técnica de nested-PCR direcionada ao gene 18S rRNA. Das 37 vacas de corte e 115 bezerros de corte analisados, quatro (10,8%) e 14 (12,2%) foram respectivamente positivos para Cryptosporidium . Das 12 vacas e 52 bezerros de leite, um (8,3%) e 14 (26,9%) foram positivos para Cryptosporidium e das 42 ovelhas e 59 cordeiros avaliados, seis (14,3%) e 12 (20,3%) amostras estavam positivas para Cryptosporidium, respectivamente. Bovinos (15,3%) e ovinos (17,8%) foram igualmente suscetíveis à infecção. Todas as propriedades dos municípios de Assaí, Ibaiti e Leópolis apresentaram animais infectados. Este estudo demonstrou que Cryptosporidium ocorre na maioria dos municípios avaliados, sendo que os bezerros de leite apresentam maior risco (Razão de chances=2,66, p-value=0,018) à infecção que os bezerros de corte e que os ovinos são tão suscetíveis à infecção quanto os bovinos e por isso, estudos nesta espécie animal devem ser mais desenvolvidos.